微流控芯片中的弱荧光信号为什么难拍？sCMOS相机能解决什么问题？

在微流控实验中，一个常见问题是：显微镜已经能够看到芯片结构，但当研究对象变成微纳通道中的弱荧光信号时，为什么图像仍然可能不够清晰？

答案并不完全取决于显微镜的放大倍率。对于弱荧光成像，真正决定图像能否用于科研分析的关键之一，是探测端能否有效记录有限的荧光信号。

中国石油大学油气微流控芯片试拍实验提供了一个典型案例。实验采用千眼狼(Revealer)Gloria 4.2

sCM

OS科学相机与荧光显微镜，对微纳通道中的荧光信号分布进行观测。

为什么微流控弱荧光信号难以清晰成像？

本次实验主要存在三个问题。

第一，微纳通道中的荧光信号本身较弱。随着有效发光区域减小，到达相机探测面的有效荧光信号有限。

第二，LED荧光照明存在光斑不均。同一视场不同区域的激发强度存在差异后，容易在图像中形成与样品实际分布无关的灰度变化。

第三，杂散光和背景信号会进一步降低弱荧光区域与背景之间的对比度。

因此，此类实验真正需要解决的并不是“有没有图像”，而是弱荧光信息能否进入可识别、可分析的数据范围。

sCMOS相机在实验中具体做了什么？

实验采用千眼狼(Revealer)Gloria 4.2 sCMOS科学相机，配合荧光显微镜和LED荧光光源组成科学成像系统。

针对不同实验状态，研究人员采用不同曝光策略。动态观察油相流动时，曝光时间约为350 ms；静态荧光分布观测不受快速时间变化约束，因此将曝光时间延长至4 s。

同时采用2×2/4×4 binning及CMS低噪声成像模式，并进一步进行暗场校正和平场校正，以降低固定背景和LED照明不均对弱荧光判断的影响。

这实际上体现了弱荧光科学成像中的一个基本原则：曝光时间、空间采样、噪声控制与图像校正需要围绕具体研究对象进行综合优化，而不能只依赖某一个相机参数。

图1-千眼狼(Revealer)Gloria 4.2 sCMOS科学相机与荧光显微镜组成的微流控弱荧光成像实验系统，用于观测微流控芯片微纳通道中的荧光信号分布

最终能看到什么？

优化成像条件后，实拍图像中的微纳通道能够被明显点亮，表明含荧光物质的油相已经进入相应通道。实验芯片最小通道结构深度约100 nm、宽度约1 μm。

本次实验能够证明的是，微纳通道中的荧光信号被有效记录，从而可以识别油相在相应通道内的空间分布。

图2-千眼狼(Revealer) Gloria 4.2 sCMOS科学相机在4 s曝光条件下拍摄的微流控芯片弱荧光图像，可观察含荧光物质油相进入微纳通道后的空间分布

图像“看得见”以后，还能做什么？

科研成像的目的通常不只是获得一张更亮的图片。

本次实验进一步使用ImageJ Threshold对荧光图像进行阈值处理，将含荧光物质油相进入的区域进行提取和标记，使原始灰度图像进一步转化为空间分布信息。

这意味着弱荧光信号一旦达到稳定可辨识水平，就具备进一步开展通道占据范围、不同区域分布差异以及后续时间序列输运分析的基础。

图3-基于Gloria 4.2 sCMOS科学相机荧光图像的ImageJ Threshold分析结果，用于提取微流控芯片微纳通道中含荧光物质油相的空间分布区域。

微流控实验为什么会用到sCMOS科学相机？

在微流控弱荧光实验中，sCMOS科学相机真正解决的是弱信号的数据可用性问题：将低光子通量条件下原本难以清晰识别的荧光信息转化为可观察、可提取和可进一步分析的数字图像。

对于荧光标记微流控、微纳通道流体分布以及微尺度输运研究，这种从“看不清”到“能够形成科学数据”的变化，才是科学相机最直接的实验价值。