炸场ASGCT 2026：中国体内CAR-T多平台竞速

其研究旨在评估基于脂质纳米颗粒的体内CAR-T疗法（HN2301）在难治性中重度系统性红斑狼疮（SLE）患者中能否实现深度组织B细胞耗竭。

6例SLE患者每两天静脉给药一次，共五次的HN2301治疗，首次输注前一周停用免疫抑制剂。

结果显示，重编程的CAR-T细胞和外周血中的CAR mRNA在每次输注后6小时达到峰值，并在48小时内恢复至基线水平。因此，外周血B细胞在首次输注后6小时内显著下降，并在一次至两次输注后完全消失。

对两名患者腹股沟淋巴结活检和骨髓穿刺样本分析表明，HN2301治疗后CD19⁺B细胞在组织中实现完全耗竭。同时，抗dsDNA等自身抗体水平在3个月内恢复正常或显著下降，SLEDAI-2K评分明显降低。所有患者耐受性良好，未观察到高级别CRS或ICANS。

其开发了mRNA–LNP–Ery的红细胞介导mRNA递送平台，其中装载mRNA的LNP以模块化的“即插即用”方式共价偶联到红细胞膜蛋白上利用红细胞天然脾脏归巢特性，实现 mRNA的靶向递送，用于体内免疫细胞重编程及CAR-髓系细胞的高效生成。

结果显示，mRNA–LNP–Ery实现了对脾脏的高度选择性mRNA递送，肝脏摄取极少，并能优先靶向脾脏CD11b⁺髓系细胞；递送HER2或CD19 CAR mRNA可在体内生成功能性的 CAR-髓系细胞，这些细胞获得促炎性、抗原提呈表型，向肿瘤迁移并介导肿瘤清除，伴随效应T细胞和NK细胞浸润增加。

在多种肿瘤模型（包括免疫冷肿瘤）中，mRNA–LNP–Ery以传统LNP十分之一的mRNA剂量诱导了更强、更持久的抗肿瘤反应。在脾切除小鼠中抗肿瘤疗效消失，在免疫缺陷小鼠中部分降低，表明疗效依赖于脾脏CAR-髓系细胞生成及与适应性免疫的协同作用。mRNA-LNP-Ery表现出极低的全身毒性。

弘基生物采用创新的慢病毒衣壳工程技术，通过假型化修饰和嵌合包膜蛋白设计，构建了具有T细胞特异性靶向能力的载体系统。该系统使用纳米抗体作为靶向结构域，与传统scFv相比，具有更高的稳定性和功能滴度。同时，设计了包含双共刺激结构域（CD28和4-1BB）的第三代CAR分子，以增强T细胞活化和持久性。

实验结果表明，工程化慢病毒衣壳系统实现了优异的靶向特异性。在混合人PBMC中，该载体仅转导CD3⁺ T细胞（特异性>95%），未检测到对B细胞、单核细胞或NK细胞的转导。独特设计的CAR分子显著增强了T细胞的活化和扩增能力。

体外细胞毒性试验表明，该系统能够维持对血液系统恶性细胞的细胞毒性长达一个月。体内疗效实验表明，该治疗方案在血液系统恶性肿瘤小鼠模型中实现了缓解，治疗组动物未观察到严重不良反应。

该研究设计了一种用于静脉给药的第三代、自失活、复制缺陷型慢病毒载体，以实现体内生成CD19 CAR-T——IV01。IV01整合了多功能T细胞结合物和源自Cocal病毒的转导惰性包膜，经筛选优化后具有特异性T细胞识别、可控T细胞活化和高效载体內化的特性。

体外研究表明，IV01能快速诱导T细胞活化和高效CAR表达，同时对单核细胞、B细胞、NK细胞等非T免疫细胞亚群的转导极低。与传统体外生成的CAR-T相比，IV01生成的CAR-T细胞在反复刺激后表现出更强的细胞杀伤活性与持久性。

在PBMC人源化小鼠荷瘤模型中，单次静脉注射IV01后，CAR-T细胞呈剂量依赖性体内生成与扩增，实现快速且持久的肿瘤清除。CAR表达严格限制于外周血T细胞，未检测到其他细胞群的脱靶转导，组织病理学分析也未显示治疗限制性器官毒性。

圆因利用专有的环状RNA平台，开发了TI-0032，一种通过靶向脂质纳米颗粒递送的新型抗CD19 CAR环状RNA治疗药物。TI-0032由封装在用新型可电离脂质配制的tLNP中的稳定circRNA载荷组成，tLNP表面通过独特的偶联位点工程化连接抗CD8人源化抗体片段，从而在CD8⁺T细胞中实现特异性和高效的靶向及表达。

在未活化的原代T细胞中，TI-0032介导了超过90%的CD8⁺T细胞中的CAR表达，并持续超过两周，突显了该平台实现长期稳定性的能力。在未活化的PBMC中进行的体外功能测定表明，TI-0032在CD8⁺T细胞中诱导了特异性、剂量依赖性的CAR表达，触发了强劲的活化和增殖。

重要的是，在来自健康供体和系统性红斑狼疮患者的PBMC中，TI-0032治疗实现了B细胞的完全清除。在人源化NOG-PBMC模型中，单剂量TI-0032在24小时内导致外周血和脾脏中B细胞的完全耗竭。

此外，在携带Nalm-6-luc肿瘤的人源化NOG-PBMC小鼠中，亚微克水平的三次TI-0032给药实现了完全的肿瘤缓解。在食蟹猴中，首次给予TI-0032替代物后仅6小时，外周血B细胞即被完全耗竭。三次给药后，通过IHC和RNA-seq证实脾脏B细胞被根除。

沙砾生物GT801作为一种新型抗CD19体内CAR-T治疗候选药物，使用T细胞靶向的脂质纳米颗粒，封装编码抗CD19 CAR的化学修饰线性mRNA。为了实现精确的T细胞靶向，使用CLAMP平台将T-LNP表面用VHH抗体进行工程化改造，该平台能够实现位点特异性抗体偶联、受控的配体密度以及高效、选择性的T细胞内化。

优化后的T-LNP平台使人PBMC中CAR表达持续超过14天。0.1 mg/kg的靶向递送在多个淋巴组织达到受体饱和，脱靶摄取低于1%。GT801在连续四轮杀伤试验中完全清除Nalm-6肿瘤细胞，并伴随功能性细胞因子释放增加。

人源化NOG小鼠单次静脉注射0.01 mg/kg GT801后，B细胞耗竭超过95%；0.1 mg/kg时多个淋巴组织中B细胞接近完全清除（<0.1%）。在CDX模型中，0.01 mg/kg剂量即显示强效抗肿瘤活性，重复给药可增强CAR-T扩增。

人体初步临床数据显示：血液瘤和自身免疫病患者体内检测到高水平的CAR表达及CAR⁺ T细胞扩增，重复给药可行。CAR表达和CAR⁺ T细胞计数约在第2天达峰，周期末降至检测不到，呈瞬时非累积动力学。血液瘤患者外周血、骨髓、淋巴结中观察到强效B细胞耗竭；自身免疫病患者B细胞显著耗竭，伴随疾病活动指数改善。未报告高级别毒性。

值得一提的是，沙砾生物同时还布局了基于慢病毒载体的体内CAR-T平台，核心管线GT860聚焦多发性骨髓瘤。 GT860是一款通过T细胞靶向慢病毒递送的双靶in vivo CAR-T。

该平台采用突变型VSV-G fusogen与优选T细胞结合子，在精准靶向T细胞、降低脱靶递送的同时，提高转导效率；独有的CAR-IGNITE增强子设计协助T细胞抵抗免疫抑制，增强增殖与肿瘤杀伤能力；双靶CAR结构（针对多发性骨髓瘤）旨在降低免疫逃逸及复发风险。

基于优化慢病毒平台的GT860载体，在无需外源性预激活的条件下，即可在体外实现T细胞中稳健且持续的CAR表达。功能上，转导后的T细胞在反复肿瘤细胞刺激下表现出强大的连续杀伤能力，并且在接触靶抗原后能够强劲扩增，增殖潜力良好。

在NOG小鼠模型中，单次静脉注射低至2×10⁶TU的GT860，可在第30天维持稳健的CAR表达；在RPMI8226肿瘤模型中，单次给药即诱导强效的抗肿瘤活性和显著的CAR-T扩增，证实其优越的体内适应性与抗原驱动的药效。效应细胞因子（包括 IFN-γ）显著上调，而TNF-α和IL-6仅观察到轻微升高，提示CRS风险较低。全面的组织病理学评估显示，所有受检器官均未见全身性毒性。

深信生物将LNP与抗CD8抗体偶联，以实现将CAR mRNA选择性递送至CD8+T细胞。利用人外周血单个核细胞（PBMC）和分离的T 细胞，优化了抗CD8抗体的选择、CAR mRNA序列、LNP组成以及偶联工艺，以最大限度地实现高效、CD8+ T细胞选择性的CAR表达。

体外实验显示，优化的tLNP能在新鲜人PBMC及分离的T细胞中诱导稳健、持久且CD8特异性的CAR表达，进而高效杀伤共培养的CD19阳性Nalm6-Luci肿瘤细胞。

在小鼠模型中，无论是CD8转基因小鼠还是接种CD19阳性肿瘤细胞的人源化NOG-PBMC小鼠，单次注射tLNP均能实现CD8+ T细胞上的CAR高效表达，并呈剂量依赖性地诱导肿瘤显著消退。

由于抗人CD19抗体与食蟹猴CD19无交叉反应，研究者在非人灵长类实验中采用了替代性抗CD20 CAR（与人和猴CD20均反应），结果显示单次给药后可在循环血液及深层淋巴组织中实现持久的B细胞清除，且B细胞恢复后主要表现为初始表型，提示发生了“免疫重置”。

针对体内CAR-T治疗对重复给药的需求，传统PEG化LNP因PEG具有免疫原性、会诱导抗PEG抗体导致加速血液清除，难以实现多次给药后的稳定疗效。为此，研究提出一种新的设计策略：用生物相容性的聚甘油（PG）替代PEG作为LNP的表面修饰聚合物，以降低免疫原性，同时保持长循环特性。通过AI辅助的脂质优化和系统的制剂筛选，以确保安全性和递送效率。

结果显示，与传统LNP相比，该平台显著减少了肝脏摄取，大幅延长了血液循环时间（下属中从0.3小时延长至3.9小时，非人灵长类中从0.8小时延长至11.4小时）。

在非人灵长类中按Q3D方案重复给药三次后，实现了长达20天的外周B细胞持续清除，且三次给药期间血液中的mRNA水平保持稳定，未出现加速清除现象，证明PG修饰成功避免了免疫识别。B细胞在第25天左右开始恢复，其中70%为初始表型，提示免疫重置。

Cocal包膜糖蛋白能够实现高滴度慢病毒载体（LVV）的生产，并可通过工程化改造改变其嗜性。基于此，宜明生物开发了一种新型体内CAR-T平台，该平台结合了去靶向的Cocal-G包膜和膜锚定的CD7纳米抗体，以实现选择性的T细胞靶向。

结果显示，该工程化的体内慢病毒载体实现了高产量，在活化PBMC中测定的上游滴度为 4×10⁸TU/mL，最终产量为2×10⁸TU/mL。在感染复数（MOI）为1.0时，使用活化PBMC，CD7靶向的LVV转导了约80%的T细胞。

生成的CAR-T细胞展现出强大的体外细胞毒性，对多发性骨髓瘤和淋巴瘤靶标的特异性肿瘤细胞杀伤率>80%。在体内，单次静脉注射5×10⁶TU可显著降低NSG小鼠模型中的肿瘤负荷。

博生吉开发了基于CD7 VHH修饰慢病毒的体内CAR生成平台，该平台能够高效转导静息T细胞和NK细胞。通过对VSVG包膜蛋白进行工程化改造，以实现去靶向、增强血清稳定性，并通过CD7-VHH进行重靶向，以特异性转导静息T/NK细胞。同时优化CD19-CAR，以驱动转导后的静息T细胞在体外和体内的活化与扩增。

在体外，GMP级别的LV009慢病毒载体，对来自健康供体和患者的静息T细胞实现了高转导效率（超过50%），且该性能不受人血清影响。其转导严格依赖于CD7，在原代B细胞等非靶细胞中未观察到脱靶转导。值得注意的是，LV009能够直接转导全血，同时生成CAR-T和CAR-NK细胞。

在体内，单次静脉注射LV009可在荷瘤人源化小鼠中生成功能性CAR-T细胞。CAR-T细胞在15-20天内达到扩增高峰，其药代动力学特征与体外生成的CAR-T细胞相当，从而显著抑制肿瘤生长并延长生存期，且未造成脱靶器官损伤。在CD34+造血干细胞重建的小鼠模型中，单次输注LV009可有效清除外周B细胞。

在安全性方面，LV009在所有模型中均表现出良好特征。与常见的CD3靶向策略相比，CD7 靶向策略显示出更优的安全性。慢病毒载体在体内约2小时内基本被清除，未检测到脱靶毒性或肝脏等器官的显著组织病理学损伤，且在整个研究期间小鼠体重保持稳定。

除了LV009，基于CD7 VHH修饰慢病毒的体内CAR生成平台，博生吉还构建了靶向CD19和PD1的双特异性CAR——LV091。

CD19/PD1-CAR驱动静息T细胞转化为功能性活化T细胞，支持其在体外和体内的稳定扩增。该策略预期通过清除B细胞实现免疫重置，同时靶向PD-1⁺T细胞以解决自身免疫病的核心病理机制，覆盖广泛的自身免疫适应症。

体外实验证实，LV091生成的CD19/PD1 双特异 CAR-T 细胞对CD19⁺靶细胞和PD1⁺靶细胞均表现出显著且持久的活性。它们能有效清除自身免疫病患者外周血中的B细胞和耗竭性PD1⁺T细胞，提示其在自身免疫病中的治疗潜力。

在含有静息T细胞的人源化肿瘤模型中，单次静脉注射LV091能显著抑制CD19⁺肿瘤生长并清除过度活化的PD-1⁺T细胞，证实了其在体内的双重抗肿瘤和免疫调节功能。未观察到明显毒性，小鼠体重保持稳定，支持其良好的安全性特征。